Chia sẻ [SOPs] XÉT NGHIỆM VÀ CHẨN ĐOÁN HÓA MÔ MIỄN DỊCH TỦY XƯƠNG CHO MỘT DẤU ẤN

XÉT NGHIỆM VÀ CHẨN ĐOÁN HÓA MÔ MIỄN DỊCH TỦY XƯƠNG
CHO MỘT DẤU ẤN (MARKER) TRÊN MÁY NHUỘM TỰ ĐỘNG
(Test and diagnostic on immunohistochemical bone marrow biopsy for a
marker by automated staining machines)​

​

I. NGUYÊN LÝ
Nhuộm hóa mô miễn dịch mảnh sinh thiết tủy xương là phương pháp nhuộm sử dụng các kháng thể đã biết để xác định kháng nguyên có trong tổ chức tủy xương. Đây là kỹ thuật kết hợp phản ứng miễn dịch và hóa chất trên máy nhuộm chuyên dụng để làm hiện rõ các kháng nguyên hiện diện trong tế bào (bào tương, màng tế bào, nhân tế bào).

II. CHỈ ĐỊNH
- Nghi ngờ u lympho xâm lấn tủy xương;
- Nghi ngờ K di căn tủy xương;
- Nghi ngờ tăng sinh bất thường các dòng tế bào trong tủy xương.

III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH
Không có chống chỉ định.

IV. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
- Kỹ thuật viên chuyên khoa xét nghiệm thực hiện kỹ thuật máy;
- Bác sĩ chuyên khoa Huyết học thực hiện phân tích kết quả.
2. Phƣơng tiên hóa chất
2.1. Dụng cụ
- Máy nhuộm hóa mô miễn dịch;
- Máy cắt tiêu bản;
- Bàn sấy;
- Micropitpet + đầu côn;
- Giá cài tiêu bản;
- Lam kính chuyên dụng (theo máy);
- Lamen gắn tiêu bản (theo máy);
- Gạc sạch.
2.2. Hóa chất
- Các hóa chất khử parafin;
- Cồn;
- Nước cất, nước rửa (Dewax);
- Dung dịch Buffer (IHC);
- Kháng thể 1 (Anti Human  Tùy từng CD theo chỉ định);
- Kháng thể 2 (Envision + HRP - REF: K5007);
- Bộ định màu DAB + Chomogen (REF: K5007);
- Dung dịch Hematoxylin 5% 100ml;
- Boom Canada: Lấy ra cốc nhỏ, để trong tủ 60oC.
2.3. Bệnh phẩm
Lốc nến mảnh sinh thiết tủy xương

V. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1. Chuẩn bị tiêu bản
- Đúc khuôn parafin mảnh sinh thiết tủy xương đã được xử lý, làm nguội
và để trong tủ lạnh 2-8oC.
- Cắt tiêu bản mỏng 0,2 um, dán trên lam kính chuyên dụng.
- Sấy khô tiêu bản trong tủ ấm 37oC trong thời gian 12 giờ.

2. Tiến hành nhuộm
- Khởi động máy nhuộm;
- Xác lập quy trình chạy; Xác định quy trình cho từng lam kính;
- Chọn hóa chất, kháng thể sử dụng theo chỉ định;
- In nhãn dán lên lam kính; Đặt từng lam kính vào khay chứa lam; Nạp khay chứa lam vào máy.
- Tiến hành nhuộm lam cho từng tiêu bản với loại kháng thể phù hợp theo chương trình đã cài đặt; Theo dõi tình trạng và tiến trình vận hành máy;
- Kết thúc nhuộm: Tháo khay chứa lam kính, lấy lam kính và gắn lamen.

VI. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Việc nhận định kết quả hình thái được khẳng định ở hai tiêu chí: âm tính và dương tính.
- Âm tính: Trên kính hiển vi quan sát thấy nhân của các tế bào bắt màu xanh tím của Hematoxylin, nguyên sinh chất không có biểu hiện gì.
- Dương tính: Nếu có sự hiện diện kháng nguyên trên tế bào, phức hợp kháng nguyên- kháng thể - DAB Chromogen sẽ cho màu vàng nâu trên nguyên sinh chất của tế bào, nhân của tế bào bắt màu xanh tím của Hematoxylin.

VII. NHỮNG SAI SÓT THƯỜNG GẶP
- Xử lý mảnh sinh thiết không tốt;
- Thời gian nhuộm các bước không phù hợp;
- Kỹ năng của người thực hiện kỹ thuật chưa ổn định.

TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Đỗ Trung Phấn (2013). Kỹ thuật xét nghiệm huyết học và truyền máu ứng
dụng trong lâm sàng. Nhà xuất bản Y học.
2. Hướng dẫn quy trình kĩ thuật Bệnh viện, Nhà xuất bản Y học, 2014.
3. Hướng dẫn sử dụng máy nhuộm hóa mô miễn dịch.

Nguồn: Quyết định 2336/QĐ-BYT ngày 20/7/2017 của Bộ trưởng Bộ Y tế về việc ban hành tài liệu Hướng dẫn quy trình kỹ thuật Huyết học - Truyền máu - Miễn dịch - Di truyền - Sinh học phân tử.