Thảo luận [SOPs] Xử lý tế bào gốc bằng phương pháp thủ công

XỬ LÝ TẾ BÀO GỐC
BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦ CÔNG
(Manual processing of stem cells)​

I. NGUYÊN LÝ
- Sử dụng dung dịch HES (Hydroxy Ethyl Starch) liên kết với hồng cầu làm tăng tỷ trọng sau đó để hồng cầu tự lắng xuống dưới để lại lớp chứa nhiều tế bào có nhân bênh trên.

- Nguồn gốc kỹ thuật: theo quy trình kỹ thuật của AABB (American Association of Blood Bank) và JCBN (the Japaneses Cord Blood Bank Network).

II. CHỈ ĐỊNH
Các mẫu máu dây rốn sau thu thập.

III. CHỐNG CHỈ ĐỊNH
Khối tế bào gốc máu ngoại vi, dịch tủy xương sau thu hoạch.

IV. CHUẨN BỊ

1. Người thực hiện
Nhân viên được đào tạo để thực hiện kỹ thuật.

2. Thiết bị dụng cụ - Hóa chất
2.1. Thiết bị:
- Tủ an toàn sinh học, tủ lạnh 4oC;
- Máy ly tâm lạnh, máy lắc túi máu, máy phân tích tế bào máu;
- Bàn ép túi máu; máy hàn dây; kìm vuốt dây túi máu, cân điện tử.
2.2. Dụng cụ:
- Bộ túi xử lý máu dây rốn;
- Hộp đựng bông tiệt trùng, pank, kẹp dây túi máu;
- Đồng hồ bấm giây;
- Bơm và kim tiêm các loại;
- Ống đựng mẫu xét nghiệm;
Tất cả các dụng cụ phải được hấp tiệt trùng.
1.3. Hoá chất
- Dung dịch HES, DMSO, Dextran 40T.
- Dung dịch khử khuẩn (cồn 70o....);
- Chai cấy vi trùng vi nấm;
- Hóa chất tiệt trùng bàn xét nghiệm, dụng cụ. 158
Tất cả các môi trường hoá chất đều đã được tiệt trùng.

V. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Kỹ thuật được thực hiện trong phòng sạch đạt tiêu chuẩn B.

1. Chuẩn bị trước khi xử lý
- Người thực hiện: rửa tay hai lần; mặc quần áo bảo hộ theo quy định;
- Sát khuẩn bề mặt túi máu dây rốn trước khi chuyển vào phòng xử lý và trước khi chuyển túi vào tủ an toàn sinh học.
- Dán barcode, ghi thông tin vào phiếu và túi xử lý.

2. Thực hiện kỹ thuật
- Cắm kim lấy mẫu làm các xét nghiệm (virus và HLA...).
- Cân túi thu thập để tính thể tích trước xử lý và lượng HES sử dụng;
- Bơm dung dịch HES vào túi mẫu và trộn đều từ 5 đến 10 phút;
- Kết nối túi mẫu với bộ túi xử lý và để tự lắng 50 phút;
- Ép lấy toàn bộ lớp huyết tương và lớp buffy-coat;
- Hàn tách túi hồng cầu và cân túi huyết tương chứa buffy-coat;
- Ly tâm túi huyết tương chứa buffy-coat để loại huyết tương;
- Hàn tách túi huyết tương và cân túi sản phẩm chứa buffy-coat;
- Lấy mẫu xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu, đếm CD34, cấy khuẩn;
- Chuẩn bị dung dịch bảo quản DMSO và Dextran theo tỷ lệ 1:1 (nồng độ DMSO là 10%, nhiệt độ 2-4oC);
- Bơm dung dịch bảo quản vào túi sản phẩn trong vòng 15phút;
- Lắc đều túi hồng cầu, huyết tương lấy mẫu lưu và làm các xét nghiệm kiểm tra: điện di, nhóm máu và công thức máu...
- Kết thúc bơm lấy trong túi sản phẩm lưu 2 tuýp và mẫu cấy vi khuẩn.
- Chuyển sản phẩm tế bào gốc sang túi lưu trữ và hàn tách các vị trí trên túi lưu giữ và trên dây;
- Cân túi sản phẩm;
- Đặt túi sản phẩm vào túi bảo vệ (overwap) hàn kín và đặt vào hộp bảo vệ kim loại (canister);
- Chuyển túi sản phẩm và mẫu đi hạ nhiệt.

3. Hoàn thiện hồ sơ và các thực hiện các xét nghiệm đánh giá
- Điền đầy đủ các thông tin trên phiếu xử lý và tính hiệu suất xử lý;
- Gửi mẫu xét nghiệm: Công thức máu, nhóm máu, virus, điện di, CD34, HLA, cấy máu đến các phòng xét nghiệm;

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1. Dazey, Bernard; Ducher, et al (2005). Cord blood processing by using a standard manual and automatic- closed system. Stem cells and Development, Vol 14 (1).

2. Lapierre V, Pellegrini N, et al (2007). Cord blood volume reduction using an automated system (Sepax) vs. a semi- automated system (Optipress II) and a manual method (hydroxyethyl starch sedimentation) for routine cord blood banking: acomparative study. Cytotherapy; 9(5):514

3. Dragoslav Domanovic. Placental/Umbbilical cord blood collection & Processing. Blood Transfusion Centre Slovania.

4. Melissa Croskell, Kathy Loper, David H.McKenna (2009). HES sedimentation for Manual Red Cell Removal, in Basic Cellular therapy manufacturing procedures, Method 26-2; Cellular Therapy: Principle, Method and Regulation. Bethesda, MD: AABB, chapter 26, p.312-4.