Là thành phần của nhiều hệ thống enzym, tham gia vào chuyển hoá trung gian, tham gia vào hệ thống men của chuỗi hô hấp tế bào, chuyển hoá acid amin và lipid. Hoạt động như coenzym thiết yếu trong nhiều phản ứng ôxy hoá và khử hoá trong chuyển hoá carbohydrat. Thiếu hụt gây tổn thương ở miệng (niêm mạc), mắt, da, cơ quan sinh dục. Khó hấp thụ sữa, protein động vật. Thiếu vitamin B2 do: tiêu chảy, bệnh gan, nghiện rượu, truyền dịch thiếu vitamin. Tái nhợt, ngâm lột khoé miệng (viêm nứt góc miệng), bề mặt môi đỏ chót như son (khô nứt môi), lằn nứt cạn. Nếu nhiễm nấm C. albicans sinh ra thương tổn lồi, trắng xám gọi là chốc mép. Lưỡi đỏ. Da: nếp mũi môi, cánh mũi, tai, mí mắt, bìu dương vật, môl lớn, âm hộ đỏ lên có vẩy nhơn nhớt, bã nhờn tích tụ ở nang lõng tạo ra loại da cá mập hay da loạn tuyến bã. Đôi khi viêm giác mạc biểu mô, làm chảy nước mắt, chói mắt, giảm thị lực (lưu ý: thiếu B6 cũng gây khô nứt môi, viêm da bã nhờn, thương tổn mắt có thể cũng do bệnh khác nữa). Điều tri: uống nhiều lần 10-30 mg/ngày. Sau dùng 2-4 mg 1 ngày. Có thể tiêm bắp thịt 5-20 mg/ngày.